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Elisa實(shí)驗：ELISA試劑盒標準操作流程
一、實(shí)驗前準備
試劑平衡?
從2-8℃取出試劑盒，所有組分(包括酶標板、標準品、檢測抗體等)需室溫平衡30分鐘，避免冷凝水干擾?。
濃縮洗滌液若有結晶，需37℃水浴至溶解?。
耗材檢查?
核對試劑盒組分與說(shuō)明書(shū)是否一致，確認酶標板無(wú)破損、污染?。
未使用的板條需密封后冷藏保存?。
二、標準品與樣本處理
標準品稀釋?
凍干標準品需離心后加指定體積稀釋液溶解，渦旋混勻?。
梯度稀釋建議使用1.5mL EP管，按2倍比例逐級稀釋(如S7→S0)，每步需換槍頭并充分混勻?。
樣本預處理?
細胞上清需3000rpm離心10分鐘去除雜質(zhì)?。
高濃度樣本需按說(shuō)明書(shū)稀釋(如5倍)?。
三、加樣與孵育
孔位布局?
設置標準品孔(梯度濃度)、樣本孔(建議復孔)、空白孔(僅加稀釋液)?。
加樣體積通常為50-100μL，槍頭需懸空垂直加液，避免觸碰孔壁?。
孵育條件?
加入檢測抗體后，37℃避光孵育1-2小時(shí)，震蕩(300rpm)可提高結合效率?。
四、洗滌與顯色
洗板規范?
手工洗板：每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復3-5次，最后拍干?。
自動(dòng)洗板機建議設置30秒浸泡程序?。
顯色控制?
底物(如TMB)需避光操作，37℃孵育15-30分鐘，顯色至孔內液體變藍?。
終止液加入后5分鐘內需完成讀數(顏色變黃)?。
五、數據讀取與分析
酶標儀設置?
雙波長(cháng)檢測(主波長(cháng)450nm，參考波長(cháng)630nm)，避免孔間干擾?。
標準曲線(xiàn)擬合?
使用CurveExpert或Excel擬合4參數曲線(xiàn)，計算樣本濃度?。
六、注意事項
關(guān)鍵控制點(diǎn)?：
避免酶標板長(cháng)時(shí)間暴露于室溫，孵育時(shí)需密封?。
不同批次試劑不可混用，HRP工作液需現配現用?。
異常處理?：
顯色過(guò)淺：檢查孵育時(shí)間或底物活性?。
背景過(guò)高：洗滌不充分或抗體濃度過(guò)高?。
(注：具體操作需以試劑盒說(shuō)明書(shū)為準，不同品牌可能存在細節差異?。)
BS-1502人內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-2489小鼠內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
BS-3364大鼠內皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒
注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗數據，具體請咨詢(xún)品牌供應商或技術(shù)老師;
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